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口服干酪乳杆菌flaB蛋白重组疫苗可增强鲤鱼对维氏气单胞菌免疫能力
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口服干酪乳杆菌flaB蛋白重组疫苗可增强鲤鱼对维氏气单胞菌免疫能力

口服干酪乳杆菌flaB蛋白重组疫苗可增强鲤鱼对维氏气单胞菌免疫能力

FSI,口服干酪乳杆菌(Lactobacillus Casei)flaB蛋白重组疫苗可增强鲤鱼对维氏气单胞菌免疫能力喻大鹏今天给大家分享一篇FISH  SHELLFISH IMMUNOLOGY的文章:口服干酪乳杆菌(Lactobacillus Casei)flaB蛋白重组疫苗可增强鲤鱼对维氏气单胞菌免疫能力,引用信息如下//维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)隶属于气单胞菌属,是一种典型条件致病菌,广泛分布于自然界中,具有高度传染性。 近年来,有关A. veronii感染鱼病的报道越来越多,给水产养殖业带来巨大损失。 研究表明,A. veronii具有强致病性,可以引起鲤鱼(Cyprinus carpio)大面积死亡。 同时,有关A. veroni感染人致病的报道增多,说明A. veroni已然影响公共卫生安全。 而接种疫苗是预防感染最佳方式之一。

已有研究表明,A. veroni感染宿主致病,是由多种毒力因子参与破坏宿主免疫系统,其中包括:脂多糖(LPS),外膜蛋白(OMPs),菌溶素(Aer),鞭毛蛋白等。

鞭毛蛋白作为一种良好的免疫抗原,可以单独免疫宿主,促进细胞因子分化等特点;在免疫反应中起着关键作用,可以说是非常具有开发疫苗的潜力。 Mohammad等人发现小鼠接种鞭毛蛋白疫苗,可以提高其细胞和体液免疫,这为鞭毛蛋白疫苗的开发提供理论依据。

粘膜免疫是机体整个免疫网络的重要组成部分,又是具有独特结构和功能的独立免疫体系。

相比于传统免疫,粘膜免疫可以与外界抗原直接接触,产生高水平抗体,快速激活宿主T细胞,以及应激反应。

而且,粘膜免疫非常适合预防动物之间大规模传染病。

采用黏膜免疫法制备的鱼类口服疫苗比传统的注射疫苗更具优势。 Zhang DX等人发现OmpAI蛋白在干酪乳杆菌(L. Casei)中表达可以提高鲤鱼感染A. veroni免疫力。 乳酸菌作为益生菌,可以有效定植在肠道,缓慢释放抗原,是非常好的抗原传递介质。 本文选取A. veroni 鞭毛flaB基因,作为免疫抗原蛋白;鲤鱼肠道分离L. CaseiCC16为抗原传递介质;同时构建表面展示抗原Lc-pPG-1-flaB和分泌抗原Lc-pPG-2-flaB质粒,检测两种flaB蛋白口服疫苗对鲤鱼感染维氏气单胞菌免疫能力的差异。

结果显示本文在L. CaseiCC16中成功表达表面展示抗原Lc-pPG-1-flaB和分泌抗原Lc-pPG-2-flaB(图1A),同时荧光显微镜下观察可见Lc-pPG-1-flaB(图1B左)和Lc-pPG(图1B右)成功电转入L. Casei。 连续传代L. Case50次,发现Lc-pPG-1-flaB和Lc-pPG-2-flaB可以稳定遗传(图2A);连续培养5h,检测L. Casei分泌抗原蛋白Lc-pPG,Lc-pPG-1-flaB和Lc-pPG-2-flaB对其生长影响,结果显示抗原表达对L. Casei(图2B)生长无任何抑制作用。 随后比较口服Lc-pPG-1-flaB,Lc-pPG-2-flaB和Lc-pPG 空载疫苗鲤鱼相比于PBS对照组,血清中flaB特异性IgM抗体变化情况,结果显示,随着免疫时间的变化,Lc-pPG-1-flaB和Lc-pPG-2-flaB实验组血清中flaB特异性IgM抗体显著升高(n=5,)(图3)。

 为确定Lc-pPG-1-flaB和Lc-pPG-2-flaB对C. carpio体液免疫影响,检测C. carpio血清酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、溶菌酶(LZM)、超氧化物歧化酶(SOD)(图4),与对照组相比,28天后显著增强(n=5,)。

同时还发现,免疫28天后,相比于比Lc-pPG 和PBS对照组,实验组Lc-pPG-1-flaB和Lc-pPG-2-flaB血清中白细胞吞噬能力显著增强(图5)。

非常有趣的是,在不同时间点检测C. carpio免疫组织IL10(图6), IL-1β(图7),IFN-γ(图8),TNF-α(图9)基因表达变化,发现Lc-pPG 和PBS并无差异,而Lc-pPG-1-flaB和Lc-pPG-2-flaB两组相比于PBS组,免疫基因表达量显著上升,但时间不同,这有可能与免疫基因在各组织中反应时间有关。 58天实验结束后,作者为检验Lc-pPG-1-flaB和Lc-pPG-2-flaB口服疫苗对鲤鱼感染维氏气单胞菌抗病力的影响,用200微升A. veroni(5106CFU/ml )感染C. carpio(n=30),结果显示,Lc-pPG-1-flaB存活率为%(图11),Lc-pPG-2-flaB存活率为(53.3%),显著高于对照组。

flaB重组干酪乳杆菌可以定植到鲤鱼的肠道,并促进免疫应答、增强鲤鱼对气单胞菌感染的抗病性,从而产生较强的免疫保护作用。

讨论:本文验证了干酪乳杆菌作为抗原呈递载体通过口服给予鱼免疫。

但是依然需要探索重组干酪乳杆菌免疫效力最佳条件和免疫剂量。

需要进一步检验干酪乳杆菌作为口服疫苗的适用性。

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